腐植酸钠清除分析

1 材料与方法 

1.1 材料与仪器 

4 种腐植酸钠均来自于天津风化煤，易溶于 水，重金属含量均低于食品标准，为便于研究， 将其编号为腐植酸钠 1、2、3、4；DPPH（1,1- 二苯基 -2- 三硝基苯肼）、三羟甲基氨基甲烷 （Tris）、浓盐酸、无水乙醇、水杨酸、硫酸亚铁、 双氧水、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、铁氰化钾、 三氯乙酸、三氯化铁，均为分析纯；实验用水 为二次蒸馏水。BS224S 万分之一电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；微量加样器（100~500 μL），上海求精生化试剂仪器有限公司；微量取样器（10~100 μL、 100~500 μL），杭州陆恒生物科技有限公司；722S 型分光光度计、KQ-100 超声波清洗仪，巩义市予华仪器有限责任公司官网；SHZ-C 水浴恒温振荡器，江苏省 金坛市华锋仪器有限公司。

1.2 DPPH 自由基清除能力的检测 

取 3 mL 不同浓度的样品溶液，加入 3 mL 0.100 0 mmol/L 的DPPH溶液，摇匀，在室温（25℃） 暗室条件下，静置 30 min 后取出，在波长 517 nm 处 内测定吸光度（蒸馏水为参比），记为A1。同法 3 mL 蒸馏水 + DPPH 溶液混匀测定吸光度记为A0。 3 mL 样品溶液 + 3 mL 蒸馏水混匀测定吸光度记为 A2。按照式（1）计算自由基清除率。

1.2 DPPH 自由基清除能力的检测 

取 3 mL 不同浓度的样品溶液，加入 3 mL 0.100 0 mmol/L 的DPPH溶液，摇匀，在室温（25℃） 暗室条件下，静置 30 min 后取出，在波长 517 nm 处 内测定吸光度（蒸馏水为参比），记为A1。同法 3 mL 蒸馏水 + DPPH 溶液混匀测定吸光度记为A0。 3 mL 样品溶液 + 3 mL 蒸馏水混匀测定吸光度记为 A2。按照式（1）计算自由基清除率。

2 结果与讨论

4 种不同浓度的腐植酸钠对 DPPH 自由基都具有一定的清除能力，且不同腐植 酸钠的清除能力随着浓度的变化均以相同的趋势变 化，随着腐植酸钠浓度的增加，清除能力逐渐提高。 当浓度大于 0.70 mg/mL，腐植酸钠对 DPPH 自由基 的清除能力增加明显。当浓度达到 1.10 mg/mL，4 种腐植酸钠的清除率分别为 95.15 %、75.50 %、97.49 % 和 97.39 %，除腐植酸钠 2 外，其余 3 种 腐植酸对 DPPH 自由基清除率均大于 95 %。综上 所述，腐植酸钠（ArOH）具有较强的抗氧化能力。

3 结论 

用 DPPH 自由基清除法、羟自由基 清除法、超氧阴离子自由基清除法、总还原力的测 定 4 种方法测得的 4 种不同的腐植酸钠都具有较强 的自由基清除能力和一定的抗氧化能力，且随着腐 植酸钠浓度的增加，其抗氧化能力逐渐增强，这说 明腐植酸钠作为一种抗氧化剂将具有较好的应用 前景。但由于腐植酸钠结构复杂，关于其清除自由 基的有效成分和作用机理尚需进一步的研究。

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